知识梳理小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com3.2基因工程的基本操作程序教学目标教学重点1.基因工程基本操作程序的四个步骤。2.DNA片段的扩增及电泳鉴定。教学难点1.利用PCR获取和扩增目的基因。2.DNA片段的扩增及电泳鉴定。第一步：目的基因的筛选与获取1.目的基因：在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。也指能够编码特定蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。2.筛选目的基因：从相关的已知结构和功能清晰的基因中筛选，是较为有效的方法之一3.获取目的基因：（1）人工合成（2）基因文库中获取目的基因（3）利用PCR获取和扩增①PCR：PCR全称为聚合酶链式反应，又叫做体外DNA扩增技术。根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。通过这项技术可在短时间内大量扩增目的基因。小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com课程标准目标解读基因工程是一种重组DNA技术。1.阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞和目的基因及其表达产物的检测鉴定等步骤。1.阐明基因工程的原理和基本操作程序。2.针对人类生产或生活中的某一需求，选取适当的基因工程的技术和方法，尝试设计获得某一转基因产品的方案。3.尝试进行PCR的基本操作并用电泳鉴定PCR的产物。小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com②PCR利用的原理：DNA半保留复制③DNA复制的基本条件：④PCR的前提：有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。⑤PCR的条件：DNA模板（需含有目的基因）。分别与模板DNA相结合的2种引物。四种脱氧核苷酸（或四种dNTP：dATP、dTTP、dGTP、dCTP）。耐高温的DNA聚合酶(Taq酶）。稳定的缓冲溶液（一般添加Mg2+）。能严格控制温度的温控设备。⑥PCR的过程：⑦PCR的结果：以指数方式扩增，即2n（n为扩增循环的次数）⑧鉴定PCR的产物：常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定产物第二步：基因表达载体的构建基因表达载体的组成：目的基因、标记基因、启动子、终止子小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com基因表达载体构建过程：一般用同一种限制酶分别切割载体和含有目的基因的DNA片段，再用DNA连接酶将两者连接。第三步：将目的基因导入受体细胞小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com1.转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内稳定存在和表达的过程。2.将目的基因导入受体细胞的方法：（1）花粉管通道法：在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，滴加DNA(含目的基因)，使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。（2）农杆菌转化法：①农杆菌的特点：农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有感染能力。当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体DNA上。②农杆菌转化法的原理：根据农杆菌的特点，将目的基因插入Ti质粒上的T-DNA中，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入细胞。③农杆菌转化法适用于那些植物：农杆菌转化法起初只被用于双子叶植物中，近年来，农杆菌转化在一些单子叶植物（尤其是水稻）中也得到了广泛应用。3.方法步骤：目的基因插入Ti质粒的T-DNA上→转入农杆菌→导入植物细胞→目的基因插入植物细胞中的染色体DNA上→目的基因表达。第四步：目的基因的检测与鉴定1.分子水平的检测(1)检测目的基因是否插入受体细胞的DNA中：DNA分子杂交或PCR等技术。基因探针：简称探针，是一段带有检测标记（同位素、荧光分子或化学发光催化剂）、且顺序已知的、与小...