小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com解惑练4PCR技术拓展应用应用1：反向PCR测定未知DNA区域当DNA的某些序列已知，而需要扩增已知序列两端的未知序列时，可采用反向PCR技术。原理：用限制性内切核酸酶切割该DNA，随后使用DNA连接酶将获得的酶切产物环化，这样就获得了已知序列两侧携带有未知序列的环状DNA分子。以该已知序列为模板设计一对相反方向的特异性引物，该引物对已知序列反向，但对未知序列却是相向的，从而得以扩增出未知序列。应用2：PCR定点突变技术该技术要使用四条引物。其中引物2和3的突起处代表与模板链不能互补的突变位点，而这两条引物有部分碱基(包括突变位点)是可以互补的。因此，分别利用引物1和2，引物3和4进行PCR后，得到的DNA片段可以通过引物2和3互补的碱基杂交在一起，再在DNA聚合酶的作用下延伸，就能成为一条完整的DNA片段。最后，用引物1和4进行扩增得到含有突变位点的DNA片段。通过测序可以检验定点突变是否成功。应用3：(实时)荧光定量PCR(RT－PCR)先从样本中提取RNA，RNA中可能有新冠病毒的RNA，同时也存在很多采样患者的组织和存在于采样部位的微生物的RNA。通过逆转录酶将样本的RNA逆转录为cDNA，并进行PCR扩增，在PCR反应体系中，包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；若反应体系存在靶序列，PCR反应时探针与模板结合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针降解，报告基团与淬灭基团分离，发出荧光。每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数(Ct值)与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高，Ct值越小(如图)。小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com跟踪训练1．如图所示，在一段未知序列的突变体DNA片段中，插入了已知序列的T－DNA，要想对T－DNA两侧的未知序列进行测序，下列做法正确的是()A．用引物①和引物④直接进行PCR扩增之后再测序B．用引物②和引物③直接进行PCR扩增之后再测序C．用DNA连接酶连接成环状后，再用引物①④PCR扩增后测序D．用DNA连接酶连接成环状后，再用引物②③PCR扩增后测序答案C解析直接用引物选①、④合行组进PCR，引物方向相反，无法完成增，选择扩A；错误用引物②和引物③可已知的实现对T－DNA序列行增，但不到期目的，进扩达预B、D错误；用DNA接酶接成后，用引物连连环状①④PCR增后序，恰好可增出扩测扩T－DNA两侧的未知序列，C正确。2．重叠延伸PCR技术是采用具有互补末端的引物，使PCR产物形成重叠链，从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸，获得想要的目的基因。某科研团队运用重叠延伸PCR技术在水蛭素基因的特定位点引入特定突变，以实现基因的定点突变，原理如图。下列说法错误的是()A．过程②需要含Mg2＋的缓冲液、DNA模板、引物、4种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶等B．若引物1、引物2组成的反应系统和引物3、引物4组成的反应系统中均进行一次DNA分子的复制后，一共会产生2种DNA分子C．经过程④获得的杂交DNA有2种，其中只有一种可以经过程⑤获得目的基因D．过程⑤使用耐高温的DNA聚合酶延伸，不需要引物答案B小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com解析程过②为PCR反，需要在添加了应Mg2＋的冲液中才能行，需要提供模板缓进DNA、分模板合的引物、别与两条链结4核酸和耐高的种脱氧苷温DNA聚合酶等，A正确；反系中各自形成两个应统两种DNA分子，但由于引物1和引物4形成原两个与DNA相同的DNA分子，所以含有引物1和4的DNA于同一属种DNA，故共形成总3种DNA分子，B；程错误过④得的交获杂DNA有2，一种种3′端，一为单链种5′端，为单链5′端为单的交链杂DNA所需为DNA，C正确；程过⑤是延伸程，程使用耐高的过该过温DNA聚合酶行催化，不需要引物，进D...