小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com知识清单37基因工程和蛋白质工程小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com考点1重组DNA技术的基本工具1．基因工程的概念：基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作重组DNA技术。对基因工程概念的理解：基因工程的别名基因剪切拼接技术、重组DNA技术、转基因技术操作环境主要在生物体外操作对象基因(DNA)操作水平DNA分子水平基本程序剪切→拼接→导入→表达结果创造出人类需要的新的生物类型和生物产品原理基因重组特点定向改造生物遗传特性；彻底打破种间界限2．基因工程的基本工具(1)限制性内切核酸酶——“分子手术刀”：切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶，又称限制酶。①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。②作用特点：切割外源DNA，对自身的DNA不起作用，从而达到保护自身的目的；专一性，能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。③作用结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式—黏性末端和平末端。(2)DNA连接酶——“分子缝合针”：将切下来的DNA片段拼接成新的DNA分子，依靠的是DNA连接酶。①DNA连接酶的作用：连接两个DNA片段的末端，拼接成新的DNA分子。②DNA连接酶的种类和特点种类E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源大肠杆菌T4噬菌体特点只能将双链DNA片段互补的黏性末端连接起来既能连接双链DNA片段互补的黏性末端，也能连接双链DNA片段的平末端，但连接平末端的效率相对较低③作用实质：DNA连接酶能将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。(3)基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”：要将外源基因送入受体补充说明：质粒作为载体的原因，质粒DNA分子有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段插入其中；携带外源DNA片段的质粒进入受体细胞后，能在细胞中进行自我复制，或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制；质粒上常有特殊的标记基因，便于重组DNA分子的筛选；质粒不影响受体细胞正常的生命活动。小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com细胞，还需要有运输工具，这就是“分子运输车”，又叫载体(或运载体)。①载体的作用：一是作为运载工具，与外源基因(即目的基因)的DNA片段结合，将目的基因转移到受体细胞中；二是在受体细胞内对目的基因进行大量的复制。②常用的载体：最常用的载体是质粒。其他载体：噬菌体、动植物病毒等。③需具备的条件能在受体细胞中稳定保存并复制。具有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段插入。具有标记基因，便于筛选含重组DNA分子的细胞。对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动。3．DNA的粗提取与鉴定(1)实验原理：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。①DNA的溶解性：DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精(利用这一原理，可初步分离DNA与蛋白质)。DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同(利用这一特点，选择适当浓度的NaCl溶液就能使DNA充分溶解，从而使杂质沉淀：或者让其他成分溶解而使DNA析出，以达到分离的目的)。②DNA的鉴定原理：在沸水浴的条件下，DNA与二苯胺试剂反应呈现蓝色。(2)实验步骤考点2基因工程的基本操作程序小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com1．目的基因的筛选与获取(1)目的基因主要是指编码蛋白质的基因，如与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。(2)获取目的基因的方法：从基因文库中获取目的基因；利用PCR获得和扩增目的基因(3)利用PCR获得和扩增目的基因①含义：PCR是聚合酶链式反应的缩写。它是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件...